Генерация культуры нейронов сверхнизкой плотности с использованием питательного слоя нейронов высокой плотности

Начните с двух многолуночных планшетов: один с травленым дном, покрытым полимером, а другой с полимерным покрытием.

Засейте высокоплотную суспензию эмбриональных нейронов в пластину с протравленным дном. Добавьте суспензию нейронов сверхнизкой плотности в покровную колодку, содержащую колодец.

Инкубируйте для обеспечения присоединения нейронов к полимерам.

Снимите покровную крышку и поместите ее поверх культуры нейронов высокой плотности, позволяя нейронам стоять друг против друга.

Травленая поверхность с возвышенными структурами создает микропространство, разделяющее нейроны разной плотности.

Культура высокой плотности действует как питательный слой и выделяет нейронный фактор роста.

Благодаря ограниченному диффузионному пространству факторы роста накапливаются вокруг нейронов, способствуя их росту и развитию нейронных проекций.

Введите нейробазальную среду с цитозина арабинозидом, который избирательно подавляет рост ненейрональных клеток.

Регулярно пополняйте запасы свежей нейробазальной среды для поддержания культуры нейронов.

В этой процедуре поместите 24-луночные планшеты с протравленным дном для нейронов высокой плотности в культуральный колпак. Удалите 300 микролитров предва