Дифференцировка клеточной линии нейробластомы человека в зрелые нейроны

Начните с недифференцированной клеточной линии нейробластомы, состоящей из нейроноподобных и эпителиальноподобных клеток в среде с высокой концентрацией сыворотки.

Удалите среду и добавьте среду для дифференцировки, содержащую сниженную концентрацию сыворотки крови, с добавлением ретиноевой кислоты.

Сывороточная депривация предотвращает пролиферацию эпителиальноподобных клеток.

Ретиноевая кислота индуцирует экспрессию нейрональных генов в нейроноподобных клетках, превращая их в более дифференцированный фенотип.

Добавьте коктейль трипсин-ЭДТА, чтобы отделить частично дифференцированные клетки.

Добавьте среду, содержащую сывороточные белки, для блокирования трипсина.

Пластинируйте клетки и введите свежую среду для дифференцировки, содержащую ретиноевую кислоту и дополнительно сниженный уровень в сыворотке.

В клетках продолжают развиваться расширенные процессы.

Добавьте трипсин, чтобы отделить клетки.

Затем добавьте среду для блокирования трипсина и поместите клетки на чашку, покрытую белком из внеклеточного матрикса, чтобы способствовать клеточной адгезии.

Наконец, добавка с бессывороточной средой, содержащей факторы роста нейронов.

Эти факторы индуцируют терминальную дифференцировку