Дифференцировка нейронных клеток-предшественников в нейроны

Начните с многолуночного планшета, покрытого желатином, содержащего нервные клетки-предшественники, полученные из эмбриональных стволовых клеток мыши, в богатой питательными веществами базальной среде для дифференцировки.

Клетки-предшественники используют эти питательные вещества из среды для поддержания своей жизнеспособности.

Инкубируйте, чтобы клетки могли прикрепиться к поверхности, покрытой желатином, затем промойте, чтобы удалить неприкрепленные клетки и мусор.

Введите базальную среду для дифференцировки с добавлением стабилизирующего агента, дополнительных питательных веществ и нервных факторов роста, имеющих решающее значение для дифференцировки клеток, а затем инкубируйте.

Клетки-предшественники потребляют питательные вещества и факторы роста, инициируя их дифференцировку в нейроны, которые начинают расширять свои клеточные процессы.

Одновременно стабилизирующий агент взаимодействует с токсичными метаболитами и защищает развивающиеся нейроны от окислительного повреждения, сохраняя их жизнеспособность.

Регулярно заменяйте среды для поддержания уровня питательных веществ.

Со временем нейроны созревают, развивая аксоны — более длинные клеточные процессы.

Кроме того, они также развивают дендриты, более короткие клеточные процессы, подтверждающие дифференцировку стволовых клеток в нейроны.

Посадите около 500 000 производных эмбриональных стволовых клеток мыши в 2 миллилитра базальной дифференцировочной среды на лунку на планшеты, покрытые желатином 0,1%. Случайным образом разделите производные на три группы, чтобы протестировать три протокола дифференцировки фазы II. Выдержите тарелку в течение шести часов. Затем дважды промойте клетки 2 миллилитрами PBS и добавьте в каждую лунку по 2 миллилитра базальной дифференцировочной среды, N2 B27 среды 1 или N2 B27 среды 2, в зависимости от протокола. Поместите планшеты в инкубатор, и дайте клеткам дифференцироваться еще 10 дней, меняя соответствующую среду каждые два дня.