Энциклопедия экспериментов JoVE
Нейронауки
0 просмотров • 3:32 мин. • July 8th, 2025
Введите дермальные фибробласты или aHDF взрослого человека, суспендированные в среде фибробластов, в микропланшет, покрытый белком внеклеточного матрикса. Инкубируйте для обеспечения адгезии клеток.
Ввести трансгенный лентивирусный вектор. После интернализации в клетку-хозяина вирусная РНК обратно транскрибируется в ДНК, которая интегрируется в геном хозяина.
Вирусная ДНК экспрессирует факторы транскрипции и короткие шпилечные РНК, или шРНК. Клеточные нуклеазы перерабатывают шРНК в небольшие интерферирующие РНК или миРНК.
Генерируемые миРНК разрушают мРНК, кодирующие транскрипционные репрессоры, тем самым подавляя их экспрессию и обеспечивая активацию генов дифференцировки нейронов.
Факторы транскрипции активируют гены, способствуя нейрональной дифференцировке aHDF.
Удалите среду, содержащую неинтернализованные векторы.
Добавьте среду для ранней конверсии нейронов, содержащую факторы роста и небольшие молекулы, которые индуцируют дифференцировку в нейроноподобные клетки.
Замените среду средой для позднего преобразования нейронов, содержащей нейротрофические факторы для созревания в нейроны.
Зрелые нейроны готовы к последующим анализам.
Приготовьте клеточную суспензию из 1 320 000 к
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео