Диссоциация и культивирование нейронов из образцов ткани гиппокампа

Начните с образцов ткани гиппокампа, содержащих нейроны и различные ненейрональные клетки.

Добавьте раствор фермента протеазы. Фермент разрушает внеклеточный матрикс ткани, инициируя диссоциацию клеток.

Промыть плоской средой для удаления остатков ферментов.

Многократно пипетируйте переваренную ткань, чтобы механически диссоциировать клетки от ткани, образуя одноклеточную суспензию.

Центрифугируйте и удалите надосадочную жидкость. Повторно суспендируйте элементы в гальванической среде.

Поместите клетки на покровное стекло, покрытое поли-D-лизином, в многолуночном планшете. Лизин усиливает прикрепление клеток.

Замените среду для покрытия средой для поддержания нейронов, содержащей необходимые питательные вещества для выживания нейронов.

Обновите половину среды поддерживающей средой, содержащей арабинозилцитозин или Ara-C.

Ara-C проникает в клетки и избирательно подавляет рост ненейрональных клеток, что приводит к их гибели.

Замените среду свежей средой для технического обслуживания, чтобы поддержать выживание нейронов.

Чтобы диссоциировать нейроны гиппокампа для культивирования, разморозьте раствор фермента протеазы, и предварительно нагрейте плоскую среду до 37 градусов Цельсия. Да