Генерация нейронов и глиальных клеток из индуцированных плюрипотентных стволовых клеток человека эмбриоидных телец

Возьмем эмбриоидные тельца, или БЭ, полученные из индуцированных плюрипотентных стволовых клеток человека. Эти БЭ состоят из трех зародышевых слоев.

Переложите EB в чашку для культур, покрытую матрицей, содержащую подходящую среду, и инкубируйте.

Матрица позволяет ЭБ прикрепляться к чашке с культурой.

Факторы роста и питательные вещества в этой среде помогают эктодермальным клеткам БЭ образовывать нейроэпителиальные агрегаты, расположенные по кругу, называемому розеткой.

Разрежьте фрагменты розетки и отсоедините их от блюда.

Соберите осколки и раскрутите их вниз.

Выбросьте надосадочную жидкость и снова суспендируйте фрагменты.

С помощью пипетки перемещайте фрагменты вверх и вниз, чтобы диссоциировать их.

Добавьте желаемое количество клеток в луночный планшет с матричным покрытием, содержащий среду для дифференцировки.

Компоненты дифференцировочной среды способствуют трансформации нейроэпителиальных клеток в полноценные нейрональные и глиальные клетки, первичные клетки нервной системы.

На второй день аспирируйте стандартный матричный раствор из заранее приготовленной 60-миллилитровой посуды и добавьте в чашку 5 миллилитров полной нейроэпителиальной индукционной среды или NRI. Работа