Дифференцировка нервных клеток-предшественников спинного мозга в моторные нейроны

Начните с питательной пластины, покрытой синтетическим полимером и белком адгезии.

Добавьте ресуспендированные в среду дифференцировки моторных нейронов нервные клетки-предшественники спинного мозга, дополненные низкомолекулярным ингибитором.

Поверхность пластины с покрытием способствует адгезии ячеек.

Низкомолекулярный ингибитор блокирует специфические протеинкиназы, предотвращая клеточный апоптоз.

Удалите отработанную среду и добавьте свежую среду для дифференцировки.

Среда содержит соединение, способствующее дифференцировке нейронных предшественников в предшественников моторных нейронов.

Кроме того, появляются глиальные предки.

Далее замените средой для дифференцировки с добавлением ингибитора синтеза ДНК.

Эти ингибиторы избирательно индуцируют повреждение ДНК и гибель у глиальных предшественников, в то время как предшественники моторных нейронов дифференцируются в зрелые нейроны.

Промойте клетки буфером и добавьте среду для дифференцировки без ингибиторов для поддержания нейронов.

Во время культивирования регулярно заменяйте среду для восполнения питательных веществ.

Кроме того, замените среду средой с добавлением белка адгезии для усиления прикрепления нейронов, создавая однородную культуру моторных нейронов.

Если культуры нейральных клеток-предшественников были заморожены, разморозьте их. После обмена среды и промывки PBS, как описано в рукописи, замените среду средой для дифференцировки моторных нейронов, содержащей 0,02 микромолярного цитозина арабинозида.

Затем инкубируйте клетки в течение 48 часов при температуре 37 градусов Цельсия и 5% углекислого газа, когда глиальные предшественники появляются как одиночные пролиферирующие плоские клетки под предшественниками постмитотических моторных нейронов, агрегированными в клеточные кластеры. В дальнейшем проведите обмен средств, как указано в рукописи.