Дифференцировка нейральных стволовых клеток в нейроны с помощью компартментализированного микрофлюидного устройства

Возьмем микрофлюидное устройство, состоящее из резервуарных колодцев, соединенных двумя отсеками, соматическим и аксональным, разделенными барьером в виде микроканавок.

Компартменты и микробороздки покрыты субстратом клеточной культуры для облегчения клеточной адгезии.

Добавьте среду для нейральных стволовых клеток в каждую лунку и инкубируйте для подготовки устройства к культивированию клеток.

Выбросьте носители. Добавьте нейральные стволовые клетки, или НСК, в лунки соматического компартмента и позвольте клеткам прилипнуть.

Добавьте среду NSC в каждую лунку и инкубируйте в увлажненной камере, чтобы предотвратить испарение среды. Во время инкубации НСК размножаются.

Замените среду НСК на среду нейронной дифференцировки и инкубируйте.

Малые молекулы в этой среде индуцируют дифференцировку НСК в нейроны внутри соматического компартмента, причем их аксоны распространяются через микроборозды в аксональный компартмент.

Дифференцированные нейроны с расширенными аксонами готовы к дальнейшим исследованиям.

Для начала растворите поли-л-орнитин в дистиллированной воде для клеточных культур, чтобы получить 600 микролитров раствора на чип. Отсасывайте оставшуюся PBS из лунок, следя за тем, чт