Выделение стволовых клеток из постнатального мозжечка мыши и дифференцировка в нервные клетки

0 просмотров4:04 мин • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Возьмем клетки, выделенные из мозжечка новорожденной мыши, содержащие стволовые клетки, нейроны и глию.

Добавьте покрытые антителами магнитные микрогранулы, которые связываются с поверхностным гликопротеином, специфичным для стволовых клеток.

Центрифугируете, удалите несвязанные шарики и снова суспендируйте клетки в буфере.

Загрузите клетки на разделительную колонку, помещенную в магнитный сепаратор, который удерживает связанные с микрогранулами стволовые клетки, пока через них протекают другие клетки.

Добавьте нейросферную среду, чтобы вымыть клетки и перенести их в микропластину. Инкубация для индуцирования образования первичных нейросфер, самообновляющихся колоний стволовых клеток.

Центрифугируйте и выбросьте среду. Ресуспендируйте нейросферы в среде, содержащей ферменты, для расщепления белков клеточной адгезии.

Центрифугируйте и удалите ферменты. Добавьте нейросферную среду и механически диссоциируйте клетки.

Инкубируйте для обеспечения пролиферации стволовых клеток и формирования вторичной нейросферы, в то время как дифференцированные клетки, лишенные характеристик стволовых клеток, не размножаются.

Перенесите нейросферы в среду для дифференцировки и инкубируйте, способствуя дифференцировке в нейроны и глию.

Поместите пробирки центрифуги на лед, затем процедите диссоциированные клетки через 40-микрометровый клеточный фильтр в 50-миллилитровую пробирку. Сверху на фильтр налейте 10 миллилитров ледяного раствора HBSS, чтобы убедиться, что клетки проходят через сетку.

Переложите отфильтрованные ячейки в свежую 15-миллилитровую центрифужную пробирку и центрифугируйте суспензию при 300-кратном g в течение 10 минут при температуре 4 градуса Цельсия. Затем с помощью вакуумного аспиратора полностью удалите надосадочную жидкость.

Ресуспендируйте клеточную таблетку в 160 микролитрах ледяного магнитного колоночного буфера. Добавьте в клеточную суспензию 40 микролитров микрогранул анти-проминина-1. Затем инкубируйте пробирки в холодильнике в течение 15 минут, чтобы антитело могло соединиться с клетками, экспрессирующими проминин-1.

Промойте ячейки от 1 до 2 миллилитров колоночного буфера X и центрифугируйте их при 300-кратном g в течение 10 минут. Отсадите надосадочную жидкость и ресуспендируйте гранулу в 1 миллилитр колонки буфера Х. Поместите магнитные колонки на магнитную подставку, и промойте их один раз 500 микролитрами буфера Х. Нанесите меченую клеточную суспензию на колонку, а проточную соберите в свежие 15-миллилитровые пробирки.

Трижды промойте колонку 500 микролитрами буфера Х. Затем извлеките колонки из магнитного поля и поместите их в 1,5-миллилитровые пробирки. Добавьте 1 миллилитр питательной среды и вставьте поршень в колонку, чтобы вымыть клетки, помеченные гранулами проминина-1.

Чтобы пройти нейросферы, перенесите их вместе с питательной средой в стерильную 15-миллилитровую центрифужную пробирку. Гранулируйте нейросферы центрифугированием в 300 раз больше g в течение 5 минут и выбросьте надосадочную жидкость.

Ресуспендируйте гранулу в 5 миллилитрах диссоциативной среды с папаином или 0,05% раствором трипсина, и инкубируйте клетки при температуре 37 градусов Цельсия в течение 10 минут. Снова центрифугируйте клеточную суспензию. Затем ресуспендируйте клетки в 5 миллилитрах нейросферной среды и диссоциируйте их, медленно пипетируя вверх и вниз 10 раз с помощью пастбищной пипетки. Поместите клетки в нейросферные среды, как описано в текстовом протоколе, и обогатите их вторичными нейросферами через 7-10 дней в культуре, как описано выше.

09:34

Автоматизированное производство человеческих индуцированных плюрипотентных стволовых клеток, полученных корковых и дофаминергических нейронов с интегрированным мониторингом live-Cell

Похожие видео

0 Просмотры

10:48

Генерация двигательных единиц человека с функциональными нервно-мышечными соединениями в микрофлюидных устройствах

Похожие видео

0 Просмотры

27:44

Культура Мышь нейронных стволовых клеток прекурсоров

Похожие видео

0 Просмотры

16:04

Выделение и культуры послеродовой мыши мозжечка гранул клеток-предшественников нейронов и нейронов

Похожие видео

0 Просмотры

04:15

Получение смешанной культуры олигодендроцитов и астроцитов из нейральных стволовых клеток взрослой мыши

Похожие видео

0 Просмотры

04:08

Методика создания двумерного монослоя клеток мозжечка из индуцированных плюрипотентных стволовых клеток

Похожие видео

0 Просмотры

04:34

Выделение и культивирование предшественников зернистых нейронов мозжечка у мышей

Похожие видео

0 Просмотры

09:52

Один мышь, двух культур: Выделение и культивирование взрослых нервных стволовых клеток из двух Нейрогенные зон отдельных мышей

Похожие видео

0 Просмотры

08:02

Выделение различных клеточных популяций из развивающихся мозжечка микродиссекции

Похожие видео

0 Просмотры

09:24

Выделение и культуры взрослых нервные стволовые клетки от мыши зоны расположенный под мозолистым телом

Похожие видео

0 Просмотры

Последнее обновление: 1 августа 2026