Выделение стволовых клеток из постнатального мозжечка мыши и дифференцировка в нервные клетки

Возьмем клетки, выделенные из мозжечка новорожденной мыши, содержащие стволовые клетки, нейроны и глию.

Добавьте покрытые антителами магнитные микрогранулы, которые связываются с поверхностным гликопротеином, специфичным для стволовых клеток.

Центрифугируете, удалите несвязанные шарики и снова суспендируйте клетки в буфере.

Загрузите клетки на разделительную колонку, помещенную в магнитный сепаратор, который удерживает связанные с микрогранулами стволовые клетки, пока через них протекают другие клетки.

Добавьте нейросферную среду, чтобы вымыть клетки и перенести их в микропластину. Инкубация для индуцирования образования первичных нейросфер, самообновляющихся колоний стволовых клеток.

Центрифугируйте и выбросьте среду. Ресуспендируйте нейросферы в среде, содержащей ферменты, для расщепления белков клеточной адгезии.

Центрифугируйте и удалите ферменты. Добавьте нейросферную среду и механически диссоциируйте клетки.

Инкубируйте для обеспечения пролиферации стволовых клеток и формирования вторичной нейросферы, в то время как дифференцированные клетки, лишенные характеристик стволовых клеток, не размножаются.

Перенесите нейросферы в среду для дифференцировки и инкубируйте, способствуя