Кокультивирование ганглиозных нейронов сетчатки с обонятельной глией

Возьмем сетчатку крысы, светочувствительный слой глаза, содержащий ганглиозные нейроны сетчатки, или ГН.

Поместите сетчатку в солевой раствор, сбалансированный холодом, чтобы предотвратить повреждение тканей.

Перенесите сетчатку в раствор, содержащий протеазу и ДНКазу, и разрежьте ее на более мелкие кусочки.

Переложите содержимое в пробирку и инкубируйте.

Протеаза разрушает внеклеточный матрикс и разрыхляет клетки, в то время как ДНКаза разрушает любую загрязняющую ДНК.

Проводите пипеткой вверх и вниз, чтобы рассеять клеточные комки.

Добавьте раствор ингибитора, чтобы остановить действие протеазы.

Центрифугируйте клетки, чтобы они осели. Удалите надосадочную жидкость и повторно суспендируйте клетки в подходящей питательной среде.

Добавьте эту клеточную суспензию к монослою обонятельной оболочки глии или OEG клеток, разновидности глиальных клеток, и инкубируйте.

ОРГ интегрируются в монослой ОЭГ, создавая кокультуральную модель для оценки нейрорегенеративного потенциала ОЭГ.

Поместите сетчатку в заранее подготовленную чашку для клеточных культур P-60 с 5 миллилитрами холодного EBSS. Затем перенесите его в чашку для клеточных культур P-60 с восстановленным папаином плюс 50 микролитров