Нейрогенез, индуцированный ретиноевой кислотой, с использованием клеток эмбриональной карциномы мыши

Возьмем суспензию клеток эмбриональной карциномы мыши, способную дифференцироваться в различные типы клеток.

Затравочные клетки на гидрофобной чашке для культивирования, содержащей среду и ретиноевую кислоту.

инкубировать. Гидрофобные поверхности предотвращают адгезию клеток, заставляя клетки образовывать агрегаты.

Ретиноевая кислота проникает в клеточные агрегаты, запуская сигнальные пути и вызывая дифференцировку в нейронные клетки-предшественники.

После инкубации соберите клеточные агрегаты.

Выбросьте носители.

Добавьте среды, содержащие ретиноевую кислоту, и высадите заполнители на гидрофобную чашку для культуры.

инкубировать. Ретиноевая кислота способствует устойчивой клеточной дифференцировке в нейроны.

Соберите агрегаты и удалите носители.

Добавьте протеолитический фермент, чтобы разрушить межклеточные спайки внутри агрегатов.

Добавьте среду, содержащую сыворотку, чтобы остановить ферментативную активность.

Механически диссоциируют агрегаты, образуя нейронную взвесь.

Центрифугируйте и выбросьте богатую ферментами надосадочную жидкость.

Ресуспендируйте нейроны в среде и засейте их на адгезивную многолуночную пластину, содержащую среду.

инкубировать. Нейроны прилипают к пласти