Дифференцировка эмбриоидных клеток организма в нейральные предшественники с помощью ретиноевой кислоты

Начните с эмбриональных стволовых клеток, культивируемых на слое фидерных клеток фибробластов, которые поддерживают стволовые клетки в их недифференцированном состоянии.

Добавьте ферменты трипсина и ЭДТА, чтобы нарушить межклеточную адгезию и отделить клетки.

Позже добавьте обогащенную сывороткой культуральную среду, чтобы остановить активность фермента, и перенесите клеточную суспензию в пробирку.

Центрифугой собирают клетки, удаляют надосадочную жидкость, а затем повторно суспендируют клетки в среде, содержащей ретиноевую кислоту.

Поместите капли этой клеточной суспензии на основание неадгезивной чашки для культивирования.

Переверните основание, чтобы образовались висячие капли, и расположите его над крышкой чашки для культуры, заполненной буфером, чтобы капли не высохли.

В висячих каплях гравитация заставляет клетки оседать на дне, в конечном итоге объединяясь в трехмерные структуры, называемые эмбриоидными телами.

Далее клетки поглощают ретиноевую кислоту, которая модулирует различные внутриклеточные сигнальные пути.

Эта модуляция стимулирует дифференцировку стволовых клеток в нейральные клетки-предшественники, обладающие способностью к продуцированию нейронов.

Начните формиров