Способ получения среды, кондиционированной олигодендроцитами

Возьмите чашку Петри с полимерным покрытием.

Добавьте линию олигодендроцитов или клетки ОЛ в подходящую питательную среду и инкубируйте.

Положительный заряд на полимерном покрытии притягивает отрицательно заряженную клеточную мембрану, усиливая прикрепление клеток к чашке. Факторы роста и питательные вещества в этой среде способствуют росту клеток.

Замените среду на бедную питательными веществами среду и инкубируйте.

Низкий уровень питательных веществ вызывает легкий стресс в клетках, заставляя их выделять белки, липиды и другие молекулы, включая факторы роста и цитокины, во внеклеточное пространство.

Соберите среду в пробирку.

Фильтр простерилизует среду для удаления клеточного мусора и нерастворимых компонентов.

Фильтрат, содержащий растворимые биологически активные молекулы, секретируемые клетками ОЛ, называется средой, кондиционированной олигодендроцитами, или ОКМ.

Храните ОКМ при более низких температурах до дальнейшего использования, чтобы предотвратить деградацию белков и других молекул, тем самым сохраняя эффективность ОКМ.

Тарелка две-три предварительно покрыты 100-миллиметровыми чашками Петри 10 миллилитровыми клеточными суспензиями.

Инкубируйте в увлажненном инкубаторе при температуре 37 градусов Цельсия под 5% углекислого газа.

В ламинарном вытяжном шкафу в стерильных условиях обновляют питательную среду 10 миллилитрами теплой Mbb 27 низкой среды.

Инкубировать в течение 2 дней в увлажненном инкубаторе при температуре 37 градусов Цельсия под 5% углекислым газом.

Чтобы получить ОКМ, соберите надосадочную жидкость, содержащую факторы, секретируемые олигодендроцитами. Простерилизуйте OCM с помощью фильтра 0,22 микрона.