Выделение нейронов вестибулярного ганглия из внутреннего уха мыши

Возьмите половину головы мышиного щенка и удалите мозг.

Разрежьте верхнюю часть черепа и иссеките окружающие ткани, чтобы визуализировать глазную капсулу, костный внешний слой, защищающий структуры внутреннего уха.

Перенесите ткань на культуральную пластину, содержащую буферную среду.

Отделите верхние и нижние вестибулярные ганглии, в которых находятся тела вестибулярных нервных клеток.

Сбрейте костный гребень и соберите лежащий под ним верхний ганглий.

Переложите верхний ганглий в свежую тарелку, содержащую буферизованную среду.

Удалите прилипшие ткани с поверхности, чтобы очистить изолированный ганглий.

Поместите ганглий в раствор, содержащий протеолитические ферменты.

Ферменты разрушают внеклеточный матрикс ткани, разрыхляя клетки.

Перенесите ганглий в чашку со стеклянным дном с полимерным покрытием, содержащую питательную среду, и механически диссоциируйте ткань, чтобы освободить клетки.

Инкубируйте, позволяя клеткам прилипнуть и создать культуру нейронов вестибулярного ганглия.

Вычерпайте мозг усыпленной мыши с помощью закрытых хирургических ножниц. Отрежьте и удалите черепной нерв, чтобы полностью отделить мозг от черепа. Начиная с затылка, снимите прозрачный пленчатый матери