Выделение и культивирование клеток-предшественников олигодендроцитов из коры головного мозга детенышей мыши

Возьмем кору мышиного щенка.

Добавьте протеолитический фермент, который переваривает внеклеточный матрикс ткани. Затем механически диссоциируйте ткани, разрыхляя клетки.

Добавьте глиальную среду и ДНКазу для разрушения любой загрязняющей ДНК.

Механически диссоциируйте ткань для высвобождения нейронов и глиальных клеток.

Как только непереваренная ткань осядет, соберите среду, содержащую клетки, и центрифугируйте. Удалите надосадочную жидкость.

Ресуспензируйте клетки в глиозной среде и положите их на колбу с внеклеточным матриксом, покрытую белком.

инкубировать. Астроциты крепче других клеток прилипают к покрытой поверхности. Глиальные среды способствуют только выживанию глиальных клеток.

Замените носитель, чтобы удалить мусор.

Инкубируйте с встряхиванием, чтобы отделить вышележащие клетки-предшественники олигодендроцитов, OPC и микроглию.

Перенесите среду с клетками на культуральную пластину.

Инкубируйте с встряхиванием для облегчения дифференциальной микроглиальной адгезии.

Перенесите неадгезивный надосадочный слой OPC на многолуночный планшет, покрытый поли-D-лизином. Инкубируйте для привержения OPC.

Замените фильтрующий материал на OPC, чтобы обеспечить рост OPC.

Добавьте 1 милли