Энциклопедия экспериментов JoVE
Нейронауки
0 просмотров • 7:57 мин. • July 8th, 2025
Возьмите трансгенную беременную мышь и хирургическим путем удалите матку с эмбрионами, содержащими флуоресцентно меченые моторные нейроны.
Перенесите матку в чашку с ледяным буфером под флуоресцентным микроскопом.
Используйте видимый свет, чтобы изолировать эмбрионы.
Удалите морду и хвост эмбрионов и расположите их в положении лежа.
Используя сигнал флуоресценции, сделайте разрез в среднем мозге, чтобы обнажить глазодвигательное и трохлеарное ядра, которые содержат моторные нейроны.
Изолируйте средний мозг, содержащий ядра.
Откройте заднюю сторону заднего мозга и спинного мозга. Изолируйте спинной мозг, иссеките оба конца и соберите колонки, содержащие спинномозговые двигательные нейроны.
Обработайте собранные ткани ферментами для диссоциации тканевого матрикса. Соберите отдельные клетки и выделите флуоресцентно помеченные нейроны с помощью FACS.
Добавьте культуральную среду к изолированным нейронам, перенесите клетки на микропланшет, покрытый культуральным субстратом, и инкубируйте, позволяя клеткам прилипать и расти.
Поддерживайте двигательные нейроны в культуре.
Начните с забора EGF-положительных эмбрионов Islet-1 у беременной мыши примерно через 11,5 дней после оплодотворения.
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео