Работа с культурами нейронных стволовых клеток на предприятии по производству клеток

Чтобы свести к минимуму контаминацию культур нейрональных стволовых клеток, используйте установку с ламинарным колпаком, буферной камерой, технологической камерой и камерой микроскопа, каждая из которых разделена герметичными дверцами.

Теперь налейте воду в тарелку для культуры в инкубаторе для поддержания влажности.

Отрегулируйте буферную камеру, технологическую камеру и параметры инкубатора до оптимального уровня.

Очистите все поверхности дезинфицирующим средством и стерильной марлей, чтобы устранить микробные загрязнения.

Поместите планшет для культуры нейрональных стволовых клеток сначала в ламинарный колпак, который обеспечивает фильтрацию воздуха.

Протрите внешнюю сторону пластины марлей, пропитанной этанолом, а затем перенесите ее в буферную камеру, которая обеспечивает отфильтрованный воздух оптимальным уровнем газа.

Наконец, переместите планшет через технологическую камеру в инкубатор и закройте дверцу.

После инкубации переместите культуральную пластину обратно в технологическую камеру вместе со свежей средой.

Уравновесьте свежую среду.

Обновите среду в тарелке для культивирования и повторно инкубируйте тарелку.

Поместите три чашки Петри в поддон для воды у основания каждого инкубатора. Наполните эти посуды стерильной водой и поддерживайте уровень воды в этих посудах, так как они имеют решающее значение для поддержания заданной относительной влажности в инкубаторе.

В графическом интерфейсе нажмите «Инкубатор». Затем нажмите на существующее значение относительной влажности ниже заданного значения и введите 85%. Затем нажмите на зеленую галочку, чтобы принять это значение.

Затем отрегулируйте буферные камеры, технологическую камеру и инкубатор в соответствии с заданными значениями газа, необходимыми для типа вводимых клеток. Очистите поверхность технологической камеры стерильной марлей и используйте негорючее дезинфицирующее средство, например, продукты на основе хлорида бензалкония.

Затем очистите перчатки и поверхности, к которым часто прикасаются, такие как дверные ручки. Затем очистите поверхность ламинарного проточного колпака и буферной камеры 70% этанолом и дайте ей высохнуть.

После этого поместите колбу или пластину с ячейками в вытяжку, а ее внешнюю поверхность кратко протрите стерильной марлевой губкой, пропитанной этанолом. Затем поместите колбу или пластину в буферную камеру и запустите коэффициент разбавления. По завершению сразу же переложите колбу или тарелку в соответствующий инкубатор.

Поскольку инкубатор находится в задней части технологической камеры, выдвиньте полку в технологическую камеру для размещения клеток и не открывайте дверцы инкубатора без необходимости или в течение длительного периода времени.

На этом этапе подготавливают клеточную среду для культивирования. Дайте среде сбалансироваться с уровнями углекислого газа и кислорода, присутствующими в системе, оставив контейнер для фильтрующего материала слегка открытым на 20 минут.

После этого удалите старую среду из лунок. Для плюрипотентных стволовых клеток удалите почти всю старую среду с небольшим количеством оставшейся старой среды, чтобы предотвратить высыхание в процессе кормления. Для нейральных стволовых клеток удалите половину старой среды. Затем добавьте свежую среду в планшеты для клеточных культур и поместите планшеты обратно в предназначенный для них инкубатор.