Очистка клеток-предшественников эндотелия CD31⁺ с помощью магнитно-активируемой сортировки клеток

Возьмите адгезивную культуру эндотелиальных клеток-предшественников или ЭПК, предшественников микрососудистых эндотелиальных клеток головного мозга.

Культура, полученная путем дифференцировки плюрипотентных стволовых клеток, содержит ЭПК, положительные на поверхностный маркер CD31 и контаминирующие CD31-отрицательные клетки.

Инкубируйте с помощью диссоциативного реагента, чтобы отделить клетки, и отфильтруйте для получения одноклеточной суспензии.

Добавьте среду для нейтрализации ферментов, центрифугуйте для удаления надосадочной жидкости и повторно суспендируйте клетки в буфере.

Инкубируйте с блокирующим реагентом для ингибирования клеточных Fc-рецепторов, предотвращая неспецифическое мечение.

Добавьте флуорофор-конъюгированное антитело, специфичное к CD31, и инкубируйте для мечения EPC.

Центрифугируйте и выбросьте несвязанные антитела. Инкубируют с комплексами антител, содержащими одно антитело, которое связывается с флуорофорами.

Введите магнитные наночастицы с полимерным покрытием и инкубируйте, позволяя наночастицам связываться со вторым антителом комплекса.

С помощью магнитного поля изолируйте клетки, связанные с наночастицами.

Выбросьте суспензию с немечеными CD31-отрицатель