Дифференцировка нервных стволовых клеток человека в нейроактивные и астроцитарные предшественники

Начнем с неадгезивных нейросфер, трехмерного агрегата нервных стволовых клеток человека в кондиционированной среде, полученной из клеточной культуры.

Эта среда содержит питательные вещества, факторы роста и компоненты внеклеточного матрикса, которые поддерживают жизнеспособность клеток.

Центрифуга для сбора нейросфер.

Обработайте их ферментами трипсином и ДНКазой, смешайте содержимое, а затем инкубируйте.

Трипсин нарушает межклеточную адгезию и способствует отслоению клеток, в то время как ДНКаза разрушает свободную ДНК, предотвращая слипание клеток.

Многократно пипетируйте содержимое до образования одноклеточной суспензии. Затем добавьте ингибитор трипсина, чтобы нейтрализовать активность фермента.

Центрифугируйте и удалите надосадочную жидкость, а затем повторно суспендируйте клетки в пролиферирующей среде, содержащей нервные факторы роста.

Поместите клеточную суспензию на покровное стекло с полимерным покрытием, помещенное в многолуночный планшет. Инкубируйте для присоединения стволовых клеток к полимеру.

Далее, на основе абсорбции специфических факторов роста, стволовые клетки дифференцируются в нейральные и астроцитарные предшественники, которые готовы к дальнейшему созреванию