Получение церебральных органоидов переднего мозга из индуцированных человеком плюрипотентных стволовых клеток

Начните с луночного планшета с низким уровнем прикрепления, содержащего индуцированные человеком плюрипотентные стволовые клетки или ИПСК в среде стволовых клеток с добавлением ингибитора рокиназы.

Ингибиторы проникают в клетки, блокируют ферменты рокиназы и поддерживают жизнеспособность клеток. Это способствует образованию агрегатов iPSC.

Замените среду средой для стволовых клеток, чтобы обеспечить рост агрегатов. Переложите их в чашку для культуры с низким уровнем прикрепления с кортикальной индукционной средой.

Компоненты этой среды заставляют ИПСК дифференцироваться в нейроэктодермальные клетки, предшественники нервов.

Переложите каждый нейроэктодермальный агрегат на пленку с неглубокими лунками.

Замените среду матрицей базальной мембраны и инкубируйте для обеспечения затвердевания матрицы и захвата заполнителей.

Перенесите эти встроенные в матрицу агрегаты в чашку, содержащую кортикальную индукционную среду, и инкубируйте с перемешиванием.

Со временем нейроэктодермальные клетки используют факторы дифференцировки и развиваются в нейроэпителиальные клетки.

Измените среду на среду для дифференцировки органоидов, что позволит клеткам созревать в более специализированные типы клето