Генерация эндотелиальных клеток головного мозга из индуцированных плюрипотентных стволовых клеток

Возьмите культуру индуцированных плюрипотентных стволовых клеток, или ИПСК, в поддерживающих средах, содержащих ингибиторы ро-киназы.

Факторы роста сохраняют клетки недифференцированными, в то время как ингибиторы рокиназы повышают выживаемость клеток.

Замените среду на свежую поддерживающую среду, удалив ингибиторы ро-киназы. Инкубируют, способствуя образованию колоний.

Регулярно заменяют на некондиционированные среды, которые обеспечивают контролируемую среду, запуская дифференцировку iPSC в нейропредшественники, а затем эндотелиальные клетки мозга с последующей пролиферацией клеток.

Замените эндотелиальными клеточными средами, содержащими ретиноевую кислоту и факторы роста фибробластов. Инкубировать.

Факторы роста фибробластов способствуют пролиферации клеток, в то время как ретиноевая кислота способствует созреванию эндотелиальных клеток мозга.

Добавьте протеолитические ферменты для отделения клеток. Соберите ячейки и центрифугуйте. Выбросьте надосадочную жидкость.

Ресуспендируйте клетки в эндотелиальной среде и засемените их на многолуночную мембранную вставку, покрытую коллагеном и фибронектином.

Лунка содержит эндотелиальные среды. Инкубируйте для селективной адгезии эндотел