Выделение кишечных глиальных клеток из подслизистой оболочки и собственной пластинки мыши

Возьмите сегмент тонкой кишки мыши, ранее лишенный продольной мышцы и миентерального сплетения, слои, содержащие кишечные нейроны, и глиальные клетки.

Разрежьте ткань и поместите ее в буфер, содержащий ЭДТА. Инкубация с укачиванием.

ЭДТА разрушает межклеточные соединения, отделяя слизистую оболочку эпителия от нижележащей собственной пластинки и подслизистой оболочки, слоев соединительной ткани, содержащих кишечные глиальные клетки.

Делайте пипетку несколько раз, чтобы вытеснить эпителиальные клетки.

Процедите через сетчатое фильтр и выбросьте проточный.

Перенесите ткань в неферментативный буфер диссоциации и инкубируйте ее с покачиванием. Диссоциативный буфер разрыхляет собственную пластинку и подслизистый внеклеточный матрикс, отделяя клетки.

Проводите пипетку несколько раз для дальнейшей диссоциации клеток.

Профильтруйте через сетчатое фильтр, чтобы собрать клетки.

Центрифугируйте и повторно суспендируйте клетки в буфере.

Возьмите лунки, покрытые адгезионным белком, содержащие глиальную питательную среду, и накройте клетки планшетами.

Покрытие способствует клеточной адгезии, в то время как факторы роста избирательно способствуют пролиферации глиальных клеток, создавая собственну