Энциклопедия экспериментов JoVE
Нейронауки
0 просмотров • 2:08 мин. • July 8th, 2025
В культуральной тарелке покройте покровный листок полиорнитином, положительно заряженным полимером, и инкубируйте.
Полиорнитин образует сетчатый слой, который помогает отрицательно заряженным клеткам прилипать к покровному стеклу.
Удалите раствор и промойте покровные стекла буферным раствором соли, чтобы удалить несвязанный полиорнитин.
Добавьте раствор, содержащий белок внеклеточного матрикса под названием ламинин, и инкубируйте.
Ламинин образует матрицу поверх покровного стекла с полиорнитиновым покрытием, усиливая прикрепление клеток.
Выбросьте раствор и возьмите небольшое количество нейральных стволовых клеток, взвешенных в среде, не содержащей фактора роста.
Добавьте эту культуру низкой плотности на подготовленный покровный стекло медленными вращательными движениями, чтобы равномерно распределить клетки.
Первоначально депривация фактора роста способствует делению клеток.
Со временем стволовые клетки дифференцируются в нейроны с длинными проекциями
В конце концов, нейроны создают шиповидные структуры над своими проекциями, как корковые пирамидальные нейроны.
Чтобы приготовить нейрональные культуры, поместите стеклянные покровные стекла в шестилуночные чашки для культивирования и добавьте полиорнитин. Инкубируйте в течение ночи под проточным колпаком. На следующий день с помощью DPBS простирайте покровные стекла три раза и добавьте ламинин. Инкубируйте под проточным колпаком не менее 10 часов.
Приготовьте питательную среду, содержащую следующие компоненты. Затем используйте среду для планшетирования и отправьте нейральные стволовые клетки или НСК с плотностью 50 000 клеток на квадратный сантиметр, пипетируя медленными вращающимися движениями, чтобы уменьшить кластеризацию клеток.