Приготовление колликуло-таламокортикальных срезов из мозга детеныша мыши

Поместите мозг мышонка на предметное стекло тыльной стороной вверх.

Обрежьте переднюю часть мозга и переместите ее на созданную плоскую поверхность.

Выровняйте дорсальную поверхность и среднюю линию мозга на предметном стекле. Разрежьте под углом, чтобы выровнять соединенные слуховые, среднемозговые и передние структуры мозга. Этими структурами являются нижний колликул или IC, медиальное коленчатое тело или MGB, таламическое ретикулярное ядро или TRN и слуховая кора или AC.

Прикрепите углово разрезанную поверхность мозга к вибратомному предметному столику с помощью агаровых блоков, убедившись, что задний мозг опирается на более тонкий блок.

Перенесите сцену в вибратом и добавьте буфер, чтобы предотвратить повреждение тканей.

Начните нарезку, чтобы найти IC, MGB, TRN и AC.

Извлеките срез, содержащий соединенные области, называемые колликуло-таламокортикальным срезом, и перенесите срез в камеру для удержания для сохранения жизнеспособности тканей.

Чтобы подготовить этап резки к нарезке, отрежьте небольшой кусок 3% агара размером примерно 1 кубический сантиметр, который будет использоваться в качестве ограничителя для мозга, и еще один кусок размером 1,5 сантиметра на 1,5 миллиметра на 3 миллиметра, который будет использоваться в качестве шишки для поддержки нижнего холма.

Затем приклейте упор к сцене цианоакрилатным клеем, а затем приклейте выступ с правой стороны упора так, чтобы он образовал угол 80 градусов. На слайде, отмеченном двумя линиями под углом 90 градусов и диагональной линией под углом 17 градусов от верхнего левого угла к нижнему правому, поместите спинную сторону мозга вверх в точке пересечения двух линий.

С помощью лезвия бритвы удалите от 2 до 4 миллиметров рострального конца мозга, чтобы создать плоскую поверхность. Затем поместите каудальную сторону мозга вверх на только что созданную плоскую поверхность. Выровняйте дорсальную поверхность мозга горизонтальной линией, а среднюю линию мозга — вертикальной линией, отмеченной на предметном стекле. Затем совместите лезвие бритвы с линией под углом 17 градусов. Наклоните бритву под углом 30 градусов и удалите примерно 3 миллиметра правой коры головного мозга в двойном диагональном разрезе.

Чтобы установить мозг на вибратомной ступени, поместите небольшой лист фильтровальной бумаги на вентральную сторону мозга так, чтобы длинное измерение было перпендикулярно средней линии. Осторожно нанесите небольшое количество цианоакрилатного клея на область перед ограничителем и слева от неровности. Затем поместите двойную диагонально разрезанную сторону мозга на клей так, чтобы каудальная часть мозга и задний мозг были прижаты к бугорку, а правая сторона мозга была против упора.

При этой процедуре быстро поместите режущий этап в вибратом. Заполните сцену раствором для резки. Далее выровняйте лезвие с верхней частью мозга. Удалите от 1 до 1,5 миллиметра от верхней части мозга. Затем нарежьте и удалите еще ломтики размером от 300 до 500 микрометров, продвигаясь глубже.

Когда видны нижний холмик, медиальное коленчатое тело и латеральное коленчатое ядро, зубчатая извилина должна выглядеть как С-образная, а структура должна быть выровнена. Получается примерно два среза по 600 микрометров. Это колликулоталамокортикальные срезы. После этого перенесите их в камеру выдержки при температуре 32 градуса Цельсия.