Индукция нервно-мышечных соединений in vitro из сконструированных плюрипотентных стволовых клеток, индуцированных человеком

Начните с сконструированных человеческих ИПСК человека, содержащих миобластную дифференцировку или кодирующий белок MYOD, индуцируемый доксициклином, в среде стволовых клеток, содержащей ингибиторы рокиназы.

Перенесите клетки в планшеты с покрытием ECM и инкубируйте для стимулирования прикрепления клеток.

Между тем, ингибитор инактивирует внутриклеточные ферменты ро-киназы, повышая жизнеспособность клеток.

Замените среду средой для стволовых клеток, содержащей доксициклин.

Доксициклин проникает в клетки и связывается с белками-активаторами. Эти комплексы связываются с промотором, индуцируя экспрессию генов в некоторых клетках и продуцируя белки MYOD, которые запускают дифференцировку стволовых клеток в мышечные клетки.

Обрабатывайте клетки миогенной дифференцировочной средой, содержащей миогенные факторы дифференцировки, чтобы способствовать образованию миотрубок, многоядерных мышечных клеток.

Позже введите среду нейронной индукции с нейронными факторами роста.

Эти факторы дифференцируют оставшиеся иПСК в моторные нейроны и шванновские клетки, которые образуют миелиновую оболочку вокруг нейронов.

Наконец, замените среду средой нервно-мышечного соединения, чтобы способствовать связя