Энциклопедия экспериментов JoVE
Нейронауки
0 просмотров • 5:34 мин. • July 8th, 2025
Возьмите участок позвоночного столба крысы и разделите его, чтобы удалить спинной мозг.
Отделите ганглии дорсальных корешков, или DRG, скопление нейронов, окруженных сателлитными глиальными клетками, или SGC.
Поместите DRG в питательную среду. Удалите нервные корешки, чтобы уменьшить загрязнение SGC.
Обработайте коллагеназой для разрушения тканевого матрикса и промойте для удаления ферментов.
Вводите трипсин для нарушения межклеточных связей. Добавьте сыворотку, содержащую белки, которые дезактивируют трипсин.
Добавьте питательную среду и механически диссоциируйте ткань. Отфильтруйте суспензию для выделения отдельных клеток и центрифугируйте для удаления остатков тканей.
Повторно суспендируйте клетки, чтобы наложить их на среду с градиентом плотности, и центрифугируйте.
Нейроны с более высокой плотностью располагаются на дне, облегчая разделение SGC.
Ресуспендируйте нейроны в культуральной среде. Перенесите их на культуральный субстрат, хорошо покрытый слоем, позволяющий прикрепить клетки.
Добавка с факторами роста нервов для выживания нейронов.
Чтобы получить нейроны DRG после забора спинного мозга, начните с удаления любых дорсальных частей, а затем с помощью стерильных и острых
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео