Выделение нейральных стволовых клеток-предшественников из перивентрикулярной области спинного мозга взрослой крысы

Начните с перивентрикулярной ткани спинного мозга взрослой крысы, области, богатой нервными стволовыми/прогениторными клетками.

Переведите ткань в раствор, содержащий папаин и ДНКазу.

Папаин, протеолитический фермент, расщепляет внеклеточный матрикс ткани, в то время как ДНКаза разрушает загрязняющую ДНК, высвобождаемую из поврежденных клеток.

Механически диссоциируйте ткань для получения одноклеточной суспензии.

Переложите суспензию в пробирку и центрифугируйте ее. Удалите надосадочную жидкость. Ресуспендируйте клетки в растворе, содержащем белок альбумин и ингибитор протеазы.

Альбумин и ингибитор деактивируют папаин.

Нанесите клеточную суспензию на раствор, содержащий альбумин и ингибитор протеазы.

Разница в плотностях между слоями образует прерывистый градиент плотности.

Центрифуга оседает неповрежденными клетками, в то время как фрагменты клеточной мембраны остаются на границе раздела.

Выбросьте надосадочную жидкость. Ресуспендируйте клетки в питательной среде и наложите на них пластины.

Факторы роста избирательно способствуют пролиферации нейральных стволовых/прогениторных клеток и их агрегации в трехмерные нейросферы.

Чтобы начать выделение нервных стволовых клеток крысы, с п