Выделение и культивирование перицитов головного мозга мышей

Добавьте буфер в ткань мозга мыши и гомогенизируйте его, чтобы освободить клетки и микрососуды.

Далее добавьте в гомогенат раствор БСА-декстрана. Перемешайте и центрифугируйте для разделения компонентов. Выбросьте надосадочную жидкость.

Восстановите микрососуды в буфере и пропустите их через фильтр, удалив более крупные сосуды.

Теперь центрифугируйте фильтрат и удалите надосадочную жидкость. Ресуспендируйте микрососуды в буфере, содержащем ДНК.

Добавьте протеолитические ферменты для высвобождения эндотелиальных клеток и перицитов.

ДНКазы разрушают ДНК.

Добавьте буфер, содержащий БСА, чтобы остановить активность фермента. Центрифугируйте и выбросьте надосадочную жидкость.

Ресуспендируйте элементы в среде и наложите их на многолуночный планшет с матричным покрытием. Инкубируют, способствуя адгезии клеток.

Регулярно меняйте носители.

Эндотелиальные клетки образуют монослой и поддерживают рост перицитов.

Последующее пассирование клеток в перицитарных средах на многолуночном планшете, покрытом желатином, способствует росту перицитов при одновременной элиминации эндотелиальных клеток.

Начните с помещения мозга определенного свободного от патогенов четырех-шестинедельного самца мыши C57 b