Получение суспензии одиночных клеток из ткани гиппокампа мыши

Возьмите перфузированные фрагменты гиппокампа взрослой мыши в диссоциационную трубку, содержащую папаин и ДНКазу.

Поместите трубку на механический диссоциатор.

Диссоциатор механически разрушает ткань, расшатывая клетки, в том числе нейроны и глиальные клетки.

Папаин разрушает внеклеточный матрикс ткани, высвобождая клетки. ДНКаза разрушает загрязняющую ДНК.

Добавьте буфер, содержащий БСА, инактивируя ферменты.

Пропустите суспензию через сетчатый фильтр, чтобы удалить крупный мусор.

Центрифугируйте фильтрат. Откажитесь от надосадочной жидкости, богатой ферментами.

Снова суспендируйте клетки в буфере и переложите их в свежую пробирку.

Добавьте градиент плотности, перемешайте и наложите на смесь буфер.

Во время центрифугирования клетки и мусор образуют отдельные слои в зависимости от их плотности.

Удалите самый верхний буферный слой и средний слой мусора.

Добавьте буфер в нижний слой, содержащий ячейки, и перемешайте. Центрифугируйте и выбросьте надосадочную жидкость, содержащую среду градиента плотности.

Ресуспендируйте клетки гиппокампа в буфере для дальнейшего анализа.

С помощью щипцов перенесите кусочки ткани гиппокампа в С-образную трубку, и добавьте в трубку 30 микролитров смеси