Приготовление одноклеточной суспензии иммунных клеток из ткани головного мозга мыши

Начнем с мозга мышей с нервными, ненейронными и иммунными клетками во внеклеточном матриксе мозга или ВКМ.

Измельчите ткань и повторно суспендируйте ее в питательной среде.

Перенесите эти фрагменты ткани в пробирку и обработайте их коллагеназой и ферментами ДНКазы-I.

Коллагеназа переваривает ВКМ, высвобождая отдельные клетки, в то время как ДНКаза-I разрушает свободную ДНК, предотвращая слипание клеток.

Затем добавьте ЭДТА для инактивации ферментов коллагеназы.

Добавьте питательную среду. Центрифугируйте и удалите надосадочную жидкость.

Добавьте раствор градиента плотности и питательную среду к клеточной грануле, создавая слой градиента низкой плотности.

Смешайте, а затем покройте раствор градиентом высокой плотности, чтобы установить разницу в плотности.

Центрифугируйте на низкой скорости, чтобы отделить иммунные клетки на границе раздела, с более легкими клеточными остатками наверху и более тяжелыми нейрональными и глиальными клетками внизу.

Удалите верхний слой, соберите иммунные клетки и перенесите их в другую пробирку.

Центрифугируйте и удалите надосадочную жидкость, затем повторно суспендируйте клетки в среде, образуя одноклеточную суспензию для последующего применения.

Насып