Методика оптимизации культуры церебральных органоидов с использованием бокового мягкого светового освещения

Возьмем, к примеру, боковую систему мягкого освещения, состоящую из акриловой доски с белыми прокладками и белыми светодиодными лампами, установленными по одному краю.

Расположите перед собой многолуночный планшет с низкой адгезией, содержащий среду для образования эмбриоидных тел.

Добавьте эмбриоидные тельца, или БЭ в пластину.

Светодиодный свет поступает со стороны акриловой плиты и излучает параллельные лучи, освещая ЭД в сторону и обеспечивая визуализацию невооруженным глазом.

Поверните пластину, чтобы вызвать завихрение потока, сходящееся EB к центру.

Замените отработанную среду свежей средой для образования ЭБ.

Соберите БЭ с помощью наконечника для пипетки с широким отверстием.

Держите пипетку вертикально, чтобы ЭБ оседали под действием силы тяжести.

Перенесите БЭ на другую пластину с низкой адгезией, содержащую среду для нервной индукции.

Прикоснитесь кончиком к среде. БЭ опускаются из-за поверхностного натяжения жидкости.

Специфические факторы в среде инициируют нейронную дифференцировку в БЭ, образуя нейроэпителиальный слой.

Используйте прозрачную акриловую доску толщиной от 0,3 до 0,5 сантиметра размером с бумагу формата А5, и наклейте белые подушечки на лицевую и заднюю стороны акриловой пластины. Затем установите ряд светодиодных белых огней по краю пластины так, чтобы лампы могли входить со стороны акриловой пластины, а затем выстреливать параллельно.

Теперь приготовьте новую шестилуночную пластину с низкой адгезией и добавьте в каждую лунку по 2 миллилитра среды для образования EB. После удаления EB вместе со средой, используя 1000-литровый наконечник для пипетки с широким отверстием, перенесите примерно 100 EB на лунку на 6-луночный планшет с низкой адгезией.

Чтобы каждый день заменять среду для образования EB тем же объемом свежей среды, вызывайте вихревой поток, вращая чашку по круговой орбите. EB или органоиды сходятся к центру скважины благодаря вторичному потоку, образующемуся при вращении. Медленно отсасывайте старую среду с помощью пипетирования к краю лунки. Не сосите слишком сильно, иначе БЭ будут удалены вместе. Затем добавьте свежие среды, чтобы повторно приостановить EB.

Для нейронной индукции подготовьте новую 6-луночную пластину с низкой адгезией с 3 миллилитрами среды для нейронной индукции на лунку. Включите боковой мягкий свет и выключите другие источники света в помещении. Теперь перенесите БЭ на 6-луночный планшет с добавлением нейроиндукционной среды, используя наконечник пипетки с широким горлышком, чтобы отсосать как БЭ, так и питательную среду. Затем держите пипетку вертикально. БЭ будут постепенно погружаться под действием силы тяжести и сходиться к устью наконечника пипетки.

Когда горлышко наконечника пипетки снова соприкасается с поверхностью жидкости, а также из-за поверхностного натяжения жидкости, EB быстро погружаются в среду. Инкубируйте образцы при температуре 37 градусов Цельсия и 5% углекислого газа в течение 24 часов.