JoVE Encyclopedia of Experiments
Нейронауки
0 просмотров • 2:12 мин • July 8th, 2025
В ответ на внешние раздражители нейральные стволовые клетки мозга дрозофилы, или НСК, выходят из состояния покоя, состояния остановки клеточного цикла, и реактивируются, чтобы начать пролиферацию.
Возьмем, к примеру, только что вылупившихся личинок дрозофилы, стадию, на которой НСК естественным образом выходят из состояния покоя in vivo.
Возьмитесь за рот крючками и телом, чтобы разделить личинку.
Найдите мозг за крючками для рта и вырежьте его.
Перенесите мозги в культуральную тарелку в лунки, содержащие среды.
В обработанных лунках среда содержит тест-гормон, в то время как в контрольных лунках гормон отсутствует. Инкубировать.
В контролируемых условиях НСК остаются в состоянии покоя из-за отсутствия внешних раздражителей.
В обработанных лунках гормон связывается со специфическими рецепторами НСК, активируя нисходящие сигнальные пути и реактивируя НСК.
Реактивированные НСК вступают в клеточный цикл и подвергаются пролиферации.
После инкубации мозг теперь готов к последующему анализу, чтобы визуализировать пролиферацию НСК, подтверждая потенциал реактивации гормона.
Препарируйте мозг личинок, помещенных во вторую стеклянную чашку для часов с помощью SSM, используя щипцы под препарирующим микроскопом и регулируя увеличение по мере необходимости. Одним щипцом возьмитесь за крючок для рта, а другим аккуратно захватите тело наполовину вниз, и потяните в обратном направлении, чтобы разделить личинку на две части. После препарирования от 15 до 20 мозгов добавьте 1 миллилитр SSM в одну лунку стерильного лотка для культур на 24 лунки. С помощью микропипетки и стерильного наконечника перенесите только что препарированные мозги в SSM, после чего следует инкубация среды с мозгами в течение 24 часов при температуре 25 градусов Цельсия.