Выделение первичных олигодендроцитов мышей с помощью иммуномагнитных шариков

Возьмите суспензию нервных клеток, включая незрелые олигодендроциты и первичные нейрональные клетки, от щенка мыши.

Повторно суспендируйте клетки в магнитном буфере для сортировки клеток, чтобы избежать слипания клеток.

Добавьте сконструированные магнитные микрогранулы, несущие на своей поверхности антитела против O4. Перемешивайте раствор, чтобы обеспечить равномерное перемешивание.

Инкубируйте для того, чтобы микрогранулы могли связываться с сульфатированным галактолипидом, антигеном O4 на олигодендроцитах, в то время как другие клетки остаются несвязанными или слабо связанными.

Промойте смесь с дополнительным буфером для сортировки ячеек.

Центрифугируйте и выбросьте надосадочную жидкость, затем снова суспендируйте клетки.

Затем пропустите связанные с шариками клетки в магнитную разделительную колонку, оснащенную фильтром, который удаляет большие скопления клеток.

Во время пробега под действием магнитного поля связанные с шариками комплексы движутся к магниту, прикрепляясь к боковым сторонам.

Промойте, чтобы удалить несвязанные и слабо связанные клетки.

Извлеките колонку из сепаратора и промойте ее пролиферативной средой, чтобы собрать первичные олигодендроциты для будущих применений.

После подсчета снова центрифугируйте клетки и повторно суспендируйте гранулу в 90 микролитрах свежего магнитного буфера для сортировки клеток на 1 х 10⁷ клеток. Далее добавьте 10 микролитров гранул анти-O4 на 1 x 10⁷ клеток и перемешайте раствор клеток, осторожно перемешивая их. Через 15 минут при температуре 4 градуса Цельсия, с легким перелистыванием, каждые 5 минут, осторожно добавляйте 2 миллилитра магнитного буфера для сортировки клеток на 1 x 10⁷ клеток для промывки центрифугированием и выбрасывайте надосадочную жидкость с помощью тщательной вакуумной аспирации.

Повторно суспендируйте гранулу в 500 микролитрах свежего магнитного буфера для сортировки клеток на каждые 1 x 10⁷ клеток и поместите магнитную колонну для сортировки гранул соответствующего размера в соответствующий магнитный сепаратор. Поместите на колонку сетчатый фильтр плотностью 40 микрон и предварительно промойте его 3 миллилитрами магнитного буфера для сортировки ячеек, позволяя буферу пройти через колонку, не давая колонке высохнуть. Добавьте ячейки в ситечко, затем промойте 1 миллилитр с помощью магнитного буфера для сортировки клеток.

Промойте колонку три раза 3 миллилитрами магнитного буфера для сортировки клеток на одну промывку и один раз средой для пролиферации олигодендроцитов. Затем переложите колонку в 15-миллилитровую трубку и с помощью поршня немедленно промывайте 5 миллилитров свежей среды для пролиферации олигодендроцитов через колонку.