Мечение маркеров поверхности нервных клеток с помощью азидосахара при совместном культивировании с эндотелиальными клетками

Начните с добавления суспензии эндотелиальных клеток мозга мыши в проницаемую мембранную вставку трансвелл-планшета.

Хорошо добавьте на дно питательную среду и инкубируйте.

Факторы роста и питательные вещества в среде помогают клеткам расти как монослой.

Хорошо извлеките медиум со дна и из вкладыша.

Вымойте внутреннюю и внешнюю поверхности вкладыша, чтобы удалить мусор.

Добавьте адгезивную среду к вкладышу и перенесите вкладыш в лунку с матричным покрытием, содержащую первичные корковые нервные стволовые и прогениторные клетки, или NSPC, и инкубируйте.

Добавьте азидосахар, неестественный аналог предшественника сиаловой кислоты, в эндотелиальные клетки и NSPC и инкубируйте.

Цитокины и хемокины, секретируемые эндотелиальными клетками, способствуют росту NSPC в большие листовидные клоны.

Азидосахара встраиваются в сиалогликанные структуры на поверхности клеток NSPC, мечая гликопротеин. Это позволяет идентифицировать белки клеточной поверхности на расширенных NSPC.

Чтобы получить эндотелиальные клетки, суспендируйте клеточную гранулу BEND3 из чашки Петри размером 0,10 см при 90% слиянии с 9 миллилитрами клеточной среды BEND3. Добавьте 1 миллилитр клеточной суспензии в одну проницаемую