Дифференцировка эмбриональных стволовых клеток мыши в сетевую популяцию нейронов

Засейте эмбриональные стволовые клетки мыши в чашке с низким уровнем прикрепления, содержащей среды для дифференцировки.

Инкубируйте при вращении, чтобы облегчить клеточную агрегацию и дифференцировку в нейронную линию.

Переложите заполнители в трубку и дайте им осесть под действием силы тяжести. Выбросьте носители.

Повторно суспендируйте и перенесите агрегаты в исходную чашку, содержащую дифференцировочную среду с добавлением ретиноевой кислоты.

Ретиноевая кислота индуцирует экспрессию нейрональных генов, запуская дифференцировку в нейральные клетки-предшественники.

Переложите агрегаты в трубку. Удалите среду и добавьте трипсин, чтобы диссоциировать агрегаты.

Добавьте ингибитор для нейтрализации трипсина.

Пипетка повторяется до получения однородной клеточной суспензии. Отфильтруйте суспензию, чтобы удалить агрегаты.

Центрифугируйте и удалите надосадочную жидкость. Повторно суспендируйте клетки в среде.

Высадите клетки на чашку с полимерным покрытием, чтобы облегчить адгезию клеток.

Извлеките носитель. Добавьте свежие среды, содержащие факторы роста, чтобы способствовать созреванию нейронов и сформировать сетевую популяцию нейронов.

Дифференцировка ЭСК в нейроны начинается во время