Генерация наклоненных срезов миндалевидного тела из мозга мыши

Возьмем мозг мыши, погруженный в ледяной буфер.

Удалите мозжечок и обрежьте передний отдел, содержащий медиальную префронтальную кору, или мПФК.

Прикрепите ткань к наклонному агаровому блоку, который приклеивается к вибратомному предметному столику.

Прикрепите дополнительные агаровые блоки, чтобы обеспечить устойчивость во время нарезки. Поместите сцену в камеру резки вибратома, заполненную кислородосодержащим ледяным буфером.

Создавайте наклонные срезы, содержащие миндалевидное тело, которое реагирует на стимулы страха и нейронные проекции от mPFC, которые формируют синаптические связи в миндалевидном теле и регулируют его активность.

Наклоненные срезы обнажают проекции, что позволяет изучить функциональную связь между mPFC и миндалевидным телом.

Разрежьте ломтики пополам и поместите их в камеру, содержащую насыщенную кислородом искусственную спинномозговую жидкость комнатной температуры для стабилизации тканей.

Инкубируйте срезы при физиологической температуре, чтобы восстановить ткань для последующих анализов.

С помощью скальпеля отрежьте мозжечок. Затем изолируйте переднюю часть мозга, содержащую медиальную префронтальную кору. Заполните режущую камеру раствором для холодной резки, поддерживаемым при температуре 4 градуса Цельсия с помощью охлаждающего устройства. Насытьте раствор кислородом.

Промокните мозг насухо фильтровальной бумагой. Приклейте блок 4% агара, который был разрезан под углом 35 градусов, к вибрационной стадии и приклейте к этому блоку заднюю часть мозговой ткани. Приклейте два дополнительных блока агара спереди и позади мозгового блока для устойчивости во время нарезки.

Поместите столик с прикрепленной тканью в режущую камеру и убедитесь, что он погружен в воду. Начните нарезать острые ломтики. Разрежьте каждый ломтик пополам и перенесите в интерфейсную камеру, снабженную кислородом ACSF при комнатной температуре. После разрезания острых срезов миндалевидного тела поместите камеру на водяную баню при температуре 36 градусов Цельсия и дайте срезам восстановиться в течение 35-45 минут.