Энциклопедия экспериментов JoVE
Нейронауки
0 просмотров • 4:43 мин. • July 8th, 2025
Возьмите зубчатую извилину из мозга мыши в холодном гомогенизационном буфере.
Механически диссоциируют для высвобождения нейронов, глии и стволовых клеток.
Мягкое моющее средство буфера проникает в клетки, высвобождая ядра и другие органеллы.
Отфильтруйте гомогенат, чтобы удалить остатки тканей. Затем центрифугируете, удалите органеллы и повторно суспендируйте в гомогенизационном буфере, чтобы лизировать все неповрежденные клетки.
Снова центрифугируйте, удалите надосадочную жидкость, содержащую высвобождающиеся органеллы, и ресуспендируйте ядра в промывном буфере.
Фильтр для удаления мусора, центрифуга и удаление надосадочной жидкости.
Введите флуоресцентный краситель ДНК для маркировки всех ядер и флуорофор-конъюгированное антитело, которое связывается с нейронным ядерным антигеном, или NeuN, помечая ядра нейронов.
Используя сортировку ядер, активированных флуоресценцией, идентифицировать агрегаты с более высокой интенсивностью флуоресценции окрашивания ДНК и более высокими свойствами рассеяния, разделяя отдельные ядра.
Анализируйте отдельные ядра, разделяя NeuN-положительные ядра нейронов и выделяя NeuN-отрицательные ядра, принадлежащие глии и стволовым клеткам.
Гомогенизируйте т
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео