JoVE Encyclopedia of Experiments
Нейронауки
0 просмотров • 4:13 мин • July 8th, 2025
Расположите мозг мыши тыльной стороной вверх.
Под микроскопом отделите полушария головного мозга. Оттяните кору, а затем гиппокамп, чтобы обнажить боковые желудочки и третий желудочек.
Соберите два боковых сосудистых сплетения. Это богатые иммунными клетками структуры мозга, которые выстилают боковые желудочки как длинная вуаль.
Соберите сосудистое сплетение третьего желудочка, представляющее собой короткую структуру с зернистой поверхностью.
Отделите мозжечок, чтобы обнажить четвертый желудочек.
Соберите сосудистое сплетение четвертого желудочка, представляющее собой длинную шаровидную структуру с зернистой поверхностью.
Поместите все сосудистые сплетения в трубку с буферным физиологическим раствором для поддержания целостности тканей.
Добавьте раствор пищеварительного фермента и инкубируйте с перемешиванием.
Фермент разрушает внеклеточный матрикс и разрыхляет клетки.
Добавьте подходящий буфер для инактивации фермента.
Центрифуга для отстаивания клеток. Выбросьте надосадочную жидкость и повторно суспендируйте клетки в свежем буфере для дальнейшего анализа.
Для начала поместите мозг, расчлененный спинной стороной мыши C57 black 6 вверх, в чашку Петри и поместите чашку ниже объективов бинокулярных луп. Удерживая мозг на месте с помощью щипцов, вставьте два конца другой пары щипцов вниз через среднюю линию между полушариями.
С помощью щипцов оттяните кору с мозолистым и гиппокампом от перегородки, обнажив боковой желудочек и часть третьего желудочка. Определите латеральное сосудистое сплетение как длинную вуаль, выстилающую боковой желудочек и расширяющуюся с обоих концов. Затем с помощью двух концов тонких щипцов собрать латеральное сосудистое сплетение. Будьте внимательны, чтобы собрать треугольную заднюю часть, скрытую задней складкой гиппокампа.
Далее потяните кору с мозолистым телом и гиппокампом контралатерального полушария, от перегородки, чтобы обнажить весь третий желудочек и противоположный боковой желудочек. С помощью тонких щипцов соберите третье сосудистое сплетение, идентифицированное как короткая структура с зернистой поверхностью. Затем соберите другое боковое сосудистое сплетение.
Затем вставьте два конца щипцов между мозжечком и средним мозгом и отделите мозжечок от моста и мозгового вещества, чтобы обнажить четвертый желудочек. Затем определите четвертое сосудистое сплетение как длинную шаровидную структуру с зернистой поверхностью, которая линьирует четвертый желудочек от латерального правого конца до левого конца между мозжечком и мозговым веществом. С помощью тонких щипцов соберите четвертое сосудистое сплетение.
После инкубации всех собранных сосудистых сплетений с коллагеназой IV осторожно пипетируйте вверх и вниз около 10 раз, чтобы завершить диссоциацию. Затем заполните пробирку до 1,5 миллилитров буфером MACS, чтобы остановить внутривенную активность коллагеназы. Далее центрифугируйте клетки и выбросьте надосадочную жидкость перед промыванием клеток 1,5 миллилитрами буфера MACS. После добавления соответствующих компенсационных шариков и растворов антител инкубируйте образцы на льду в течение 30-45 минут, защищая их от воздействия света. Затем наполните пробирки 1,5 миллилитрами буфера MACS.
В данной статье подробно описывается метод выделения тканей сосудистого сплетения из головного мозга мыши, в частности, из боковых и четвертого желудочков. Процедура включает в себя диссекцию, обработку ферментами и ресуспендирование клеток для последующего анализа.
Выделение иммунных клеток из сосудистого сплетения хориоидеи мыши позволяет детально изучать нейроиммунные взаимодействия, имеющие значение для моделей заболеваний ЦНС. Эта возможность способствует валидации мишеней на ранних этапах и снижению механистических рисков при разработке препаратов для лечения нейровоспалительных и нейродегенеративных заболеваний. Данный метод создает основу для воспроизводимого количественного анализа иммунных клеток в релевантных при патологии отделах головного мозга.
Данный протокол изоляции иммунных клеток предназначен для этапов от ранних открытий до доклинических исследований, что позволяет проводить изучение механизмов и разработку анализов для программ, направленных на центральную нервную систему (ЦНС).
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Последнее обновление: 29 августа 2026