Получение смешанной культуры глиальных клеток из мозга неонатальной мыши

Начните с мозга неонатальной мыши и перенесите его в пробирку, содержащую раствор протеолитического фермента.

Ферменты разрушают внеклеточный матрикс ткани и инициируют диссоциацию клеток.

Многократно промойте переваренную ткань питательной средой для удаления ферментов.

Используйте пипетку большего диаметра, чтобы многократно перемещать ткань через пипетку, чтобы диссоциировать ее на более мелкие фрагменты.

Затем с помощью пипетки меньшего диаметра продолжайте диссоциацию фрагментов, создавая клеточную суспензию.

Отфильтруйте эту суспензию, чтобы удалить клеточные скопления и получить одноклеточную суспензию, содержащую первичные нейроны и смешанную популяцию глиальных клеток, включая микроглию и астроциты.

Посейте клетки в колбу для культивирования, содержащую питательную среду, и инкубируйте для повышения их адгезии.

Со временем отсутствие факторов роста нейронов в среде вызывает гибель нейронов.

Замените отработанный носитель на свежий. Глиальные клетки используют питательные вещества и размножаются, создавая смешанную глиальную культуру астроцитов и микроглии.

Перенесите мозг в 50-миллилитровую трубку, содержащую 2 миллилитра 0,25% трипсина-ЭДТА, и инкубируйте в течение 15 мин