Создание культуры глиальных клеток Мюллера, полученной из сетчатки мышей

Возьмем, к примеру, сетчатку мыши, содержащую глиальные клетки Мюллера, или MG-клетки, и нейроны.

Поместите их в диссоциативный раствор с пищеварительными ферментами и инкубируйте с легким покачиванием, чтобы обеспечить равномерное распределение ферментов.

Эти ферменты разрушают внеклеточный матрикс, отделяя отдельные клетки.

Проводите пипеткой по сетчатке вверх и вниз несколько раз, чтобы освободить клетки.

Добавьте ингибитор, чтобы остановить активность фермента, затем центрифугируйте.

Выбросьте надосадочную жидкость.

Ресуспендируйте клетки в средах, содержащих фактор роста, специфичный для клеток MG.

Перенесите клетки в лунку и инкубируйте.

Со временем фактор роста в среде способствует росту и размножению MG-клеток, в то время как неделящиеся нейронные клетки погибают.

Извлеките носитель. Постирайте с помощью буфера для соли.

Инкубируйте с пищеварительным ферментом, чтобы отделить клетки от лунки.

Соберите клетки в пробирку, а затем центрифугируйте.

Выбросьте надосадочную жидкость, содержащую мертвые нейронные клетки.

Ресуспендирование MG-клеток в среде для дальнейшего анализа.

Приготовьте смесь для диссоциации ДНКазы папапина, как описано в рукописи. Теперь с помощью пипетки дл