Выделение клеточных популяций из ткани мозга с помощью сортировки ядер, активируемых флуоресценцией

Переложите кусочек свежезамороженной ткани человеческого мозга в подходящую кофемолку, содержащую буфер для холодного лизиса.

Двигайте пестиком вверх и вниз, чтобы механически разорвать ткань, освобождая клетки.

Молекулы детергента в буфере для лизиса разрывают клеточную мембрану, высвобождая ядра.

Переложите содержимое в подходящую центрифужную пробирку и добавьте на дно пробирки буфер холодной сахарозы, создавая градиент плотности.

Центрифуга на высокой скорости отделит ядра на дне пробирки.

Выбросьте надосадочную жидкость и повторно суспендируйте ядра в буферном солевом растворе.

Добавьте к ядрам специфичные флуорофор-конъюгированные антитела-мишени и инкубируйте, чтобы антитело могло связываться со своим целевым ядерным белком.

Добавьте краситель для ядерного окрашивания, чтобы визуализировать неповрежденную ДНК.

Выполняйте сортировку ядер, активируемых флуоресценцией, чтобы сортировать ядра различных клеточных популяций на основе отчетливых флуоресцентных сигналов.

Начните препарировать примерно от 200 до 400 миллиграммов ткани из свежего, замороженного образца коры головного мозга взрослого человека. Поместите салфетку в 7-миллилитровый стеклянный тканевый механизм, содержащи