Выделение клеточных популяций из ткани мозга с помощью сортировки ядер, активируемых флуоресценцией

0 views • 3:14 min • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Переложите кусочек свежезамороженной ткани человеческого мозга в подходящую кофемолку, содержащую буфер для холодного лизиса.

Двигайте пестиком вверх и вниз, чтобы механически разорвать ткань, освобождая клетки.

Молекулы детергента в буфере для лизиса разрывают клеточную мембрану, высвобождая ядра.

Переложите содержимое в подходящую центрифужную пробирку и добавьте на дно пробирки буфер холодной сахарозы, создавая градиент плотности.

Центрифуга на высокой скорости отделит ядра на дне пробирки.

Выбросьте надосадочную жидкость и повторно суспендируйте ядра в буферном солевом растворе.

Добавьте к ядрам специфичные флуорофор-конъюгированные антитела-мишени и инкубируйте, чтобы антитело могло связываться со своим целевым ядерным белком.

Добавьте краситель для ядерного окрашивания, чтобы визуализировать неповрежденную ДНК.

Выполняйте сортировку ядер, активируемых флуоресценцией, чтобы сортировать ядра различных клеточных популяций на основе отчетливых флуоресцентных сигналов.

Начните препарировать примерно от 200 до 400 миллиграммов ткани из свежего, замороженного образца коры головного мозга взрослого человека. Поместите салфетку в 7-миллилитровый стеклянный тканевый механизм, содержащий 4 миллилитра ледяного буфера для лизиса на льду, и измельчите ткань примерно 50 раз.

Переложите гомогенат в 12-миллилитровую ультрацентрифужную полипропиленовую пробирку. С помощью пипетки объемом 5 мл добавьте 6,5 мл ледяного буфера сахарозы на дно ультрацентрифужной пробирки, не нарушая границу раздела между сахарозой и тканевым гомогенатом.

Чтобы собрать ядра, ультрацентрифугируйте лизат в течение одного часа при 101,814 умноженных на g, и осторожно отсасывайте надосадочную жидкость и мусор, не нарушая гранулу. Добавьте PBS в ультрацентрифужную пробирку, повторно суспендируя ядра гранул

.

Для флуоресцентно-активируемой сортировки выделенных ядер добавьте приблизительно 20 микролитров ресуспендированного образца в раствор антитела, содержащий конъюгированное с AlexaFlour555 мышиное антитело против NeuN. Добавьте примерно 20 микролитров ресуспендированного образца в раствор антитела, содержащий APC-конъюгированное антитело мыши к PAX6. После одночасовой инкубации при температуре 4 градуса Цельсия с встряхиванием, защищенным от света, добавьте DAPI в соотношении 1 к 1000 ко всем образцам и контрольной группе.

07:56

Культивирование в естественных условиях-как мышиных астроциты, используя протокол быстрый, простой и недорогой AWESAM

Related Videos

0 Views

06:22

Выделение ядер из свежезамороженных опухолей головного мозга для одноядерных РНК-seq и ATAC-seq

Related Videos

0 Views

08:16

Флуоресцентно-активированное отрицательное сортировка нейронов в сочетании с секвенированием РНК одиночных ядер для изучения нейрогенной ниши гиппокампа

Related Videos

0 Views

10:58

Изоляция нейронов ядра из человеческих тканей мозга Посмертные

Related Videos

0 Views

03:50

Выделение микроглии методом иммуноокрашивания Сопряженная сортировка клеток: метод иммуноокрашивания для выделения микроглии из клеток мозга рыбок данио-рерио с использованием сортировки флуоресцентных активированных клеток

Related Videos

0 Views

04:35

Выделение флуоресцентно меченых нейронов из мозга мышей

Related Videos

0 Views

04:43

Метод выделения ядер из ненейрональных клеток в зубчатой извилине гиппокампа

Related Videos

0 Views

08:37

Использование флуоресцентной активированной сортировки клеток для изучения тип-специфической для клеток экспрессии генов в тканях мозга крыс

Related Videos

0 Views

08:37

Флуоресценция Активированный сортировки клеток (FACS) и экспрессии генов Анализ Fos-экспрессирующих Нейроны из свежих и замороженных крыс ткани головного мозга

Related Videos

0 Views

07:49

Одноместный клеточной РНК последовательности нейронов дневно обозначенные мыши, с помощью ручной сортировки и двойной в Vitro транскрипция с абсолютной Счетчики виртуализации (дива Seq)

Related Videos

0 Views

Last updated: 18 July 2026