Энциклопедия экспериментов JoVE
Нейронауки
0 просмотров • 5:00 мин. • July 8th, 2025
Возьмите перфузированные фрагменты гиппокампа крысы.
Инкубируйте с папаином, чтобы переварить внеклеточный матрикс ткани и разрыхлить клетки, включая нейроны, астроциты и микроглию.
Добавьте DNase и перемешайте.
Механически диссоциируйте ткань с помощью пипеток прогрессивно уменьшающегося диаметра для получения одноклеточной суспензии. Инкубируйте ДНКазу, чтобы разрушить загрязняющую ДНК.
Пропустите суспензию через сетчатый фильтр, удаляя мусор.
Добавьте буфер, содержащий двухвалентные ионы, чтобы остановить ферментативную активность.
Центрифугируйте и удалите богатую ферментами надосадочную жидкость.
Теперь добавьте буфер и антимиелиновые магнитные шарики. Инкубируйте бусины, чтобы связать остатки миелина.
После инкубации центрифугируйте и удалите надосадочную жидкость.
Повторно суспендируйте смесь в буфере и загрузите ее на магнитную разделительную колонну, содержащую ферромагнитные сферы, помещенные в магнитное поле магнитного сортировщика.
Магнитное поле удерживает связанный с магнитными шариками миелиновый мусор в колонке, в то время как клетки, свободные от миелина, проходят через него.
Промойте колонку буфером и соберите проточные каналы, содержащие нейроны, астроциты и микр
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео