Дифференцировка клеток-предшественников глазного отика в сенсорные эпителиальные клетки с последующим иммуноокрашиванием
Энциклопедия экспериментов JoVE
Нейронауки
0 просмотров • 3:55 мин. • July 8th, 2025
Культура увековечила мультипотентные клетки отического предшественника, или iMOP, в средах.
Факторы роста в средах способствуют пролиферации iMOP и образованию колоний, создавая отосферы.
Соберите отосферы и дайте им осесть под действием силы тяжести.
Удалите среду и добавьте дифференцировочную среду, в которой отсутствуют факторы роста. Наложите на пластины отосферы.
Отсутствие факторов роста инициирует дифференцировку iMOP в сенсорные эпителиальные клетки.
Соберите дифференцированные отосферы и дайте им осесть.
Удалите медиа и добавьте фиксатор для сохранения морфологии клеток.
Затем добавьте моющее средство для проникновения клеточных и ядерных мембран.
Добавьте блокирующий буфер для предотвращения связывания неспецифических антител.
Введение первичных антител, нацеленных на определенный маркер дифференцировки.
Добавьте флуорконъюгированные вторичные антитела, нацеленные на первичные антитела, флуоресцентно меченный фаллоидин для окрашивания актина и ДНК-связывающий краситель для окрашивания ядер.
Монтируйте отосферы.
С помощью флуоресцентной микроскопии визуализируйте окрашивание для подтверждения дифференцировки iMOP.
Через три дня после нанесения покрытия используйте гравитац
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео