Дифференцировка иммортализованных мультипотентных отических предшественников в спиральные ганглиозные нейроны и оценка дифференцировки

Возьмите многолуночный планшет, содержащий стерильные покровные стекла, покрытые субстратом для клеточных культур.

Введение иммортализованных мультипотентных отических предшественников, или iMOP, в среду дифференцировки нейронов.

iMOPs являются предшественниками различных клеток внутреннего уха, включая спиральные ганглиозные нейроны, или SGN, которые передают слуховую информацию в мозг.

Инкубируют, позволяя клеткам прилипнуть к субстрату. Среда индуцирует дифференцировку iMOP в SGN.

Добавьте фиксатор для индуцирования сшивки белков, сохраняя морфологию клеток, и детергентный раствор для проникновения в клеточные мембраны.

Введите блокирующий реагент для предотвращения неспецифической маркировки.

Добавьте флуорконъюгированные антитела, специфичные к маркерам дифференцировки нейронов, и инкубируйте, позволяя антителам помечать SGN.

Промойте для удаления несвязанных антител и закрепите покровные стекла с помощью монтажной среды, содержащей флуоресцентное ядерное пятно.

С помощью флуоресцентной микроскопии можно обнаружить сигналы антител, чтобы подтвердить дифференцировку iMOP в SGN.

Сначала очистите круглые стеклянные покровные стекла, поместив их в стерильную 100-миллиметровую плас