Культивирование ex vivo и визуализация глазодвигательных срезов трансгенных эмбрионов мышей

Возьмите трансгенную беременную мышь, хирургически изолируйте матку, содержащую эмбрионы, и промойте ее, чтобы удалить остатки крови.

Удалите эмбрионы, содержащие флуоресцентно меченые моторные нейроны, и перенесите их на крышку многолуночного планшета.

Добавьте расплавленную агарозу и охладите крышку, чтобы вызвать образование геля, внедряя эмбрионы.

Под флуоресцентным микроскопом выровняйте глазодвигательные ядра и глаза в линию и обрежьте агарозу параллельно линии.

Закрепите эмбрион на стадии образца и поместите его в вибратомную камеру, заполненную буфером для холодной нарезки.

С помощью вибратома сгенерируйте срезы, содержащие глазодвигательные ядра и глаза. Ядра образуют глазодвигательные нервы, которые контролируют движение глаз.

Переложите срезы на вкладыши для культур внутри многолуночной пластины, содержащей питательную среду, и инкубируйте.

Используя флуоресцентный микроскоп, делайте снимки через равные промежутки времени, чтобы наблюдать за флуоресцентно помеченными глазодвигательными нейронами, расширяющими аксоны к глазам.

Перед началом процедуры, во-первых, подтвердите беременность с помощью УЗИ на эмбриональный день 10,5 от запланированного периода случки. Соберите