Дифференцировка индуцированных человеком плюрипотентных стволовых клеток в микрососудистые эндотелиальные клетки головного мозга

Начните с многолуночного планшета, содержащего индуцированные человеком плюрипотентные стволовые клетки, или ИПСК в среде с ингибитором ро-киназы, который способствует выживанию клеток.

Замените среду незаменимой средой, содержащей питательные вещества и факторы роста.

Инкубируйте для обеспечения пролиферации и дифференцировки иПСК в клетки-предшественники.

Замените эту среду средой для дифференцировки с добавлением факторов роста фибробластов и ретиноевой кислоты, затем инкубируйте.

Факторы роста способствуют дифференцировке клеток-предшественников в микрососудистые эндотелиальные клетки, в то время как ретиноевая кислота способствует синтезу белков плотных соединений.

Промойте и обработайте клетки раствором фермента ЭДТА, чтобы отделить клетки, создав одноклеточную суспензию.

Центрифуга для сбора клеток и удаления надосадочной жидкости. Затем ресуспендируйте клетки в свежей среде для дифференцировки.

Поместите эту клеточную суспензию в многолуночную пластину, покрытую коллагеном и адгезионными белками.

Инкубируйте для обеспечения адгезии клеток, образуя плотные соединения между клетками, напоминающие микрососудистые эндотелиальные клетки мозга.

Чтобы индуцировать дифференцировку