Выделение и культивирование клеток дорсолатерального конечного мозга эмбриона мыши

Возьмите эмбрион мыши в буфер и отделите череп, чтобы изолировать мозг.

Удалите мозговые оболочки, пленчатый слой, покрывающий мозг.

Рассеките мозг, чтобы разделить полушария.

Изолируйте дорсолатеральные головные мозги от полушарий и перенесите их в трубку.

Дорсолатеральные мозговые мозги богаты нейронами и нервными клетками-предшественниками.

Центрифугируйте и удалите надосадочную жидкость.

Добавьте раствор фермента. Ферменты разрушают тканевый матрикс, разрыхляя клетки.

Введите пролиферативную среду, содержащую сыворотку. Сывороточные белки подавляют активность ферментов.

С помощью пипетки можно механически диссоциировать ткань, образуя клеточную суспензию.

Центрифугируйте и удалите надосадочную жидкость, содержащую инактивированные ферменты и остатки тканей.

Ресуспендируйте клетки в пролиферирующей среде.

Перенесите клетки на микропланшет, покрытый субстратом для клеточной культуры.

Инкубируйте клетки, чтобы они прилипли к субстрату. Среда способствует пролиферации клеток-предшественников.

Начните с удаления мозга от 5 до 10 эмбрионов Е14 в чашке Петри с холодной средой для вскрытия. С помощью щипцов осторожно вытяните кожу и череп, а также изолируйте мозг. Во время работы под с