Создание культуры клеток ганглиев первичного дорсального корешка из позвоночного столба крысы
Энциклопедия экспериментов JoVE
Нейронауки
0 просмотров • 5:18 мин. • July 8th, 2025
Возьмем позвоночный столб крысы. Сделайте два надреза по его бокам и один боковой надрез.
Удалите спинные мышцы и дорсальную часть позвонков.
Извлеките спинной мозг.
Определите ганглии дорсальных корешков, или DRG, расположенные с обеих сторон вдоль поясничных позвонков.
DRG содержат нейроны, окруженные глиальными клетками.
Акцизировать ДРГ и собрать их в посуду. Многократно промойте салфетку фильтрующим материалом, не содержащим сыворотки.
Перенесите DRG в планшет с раствором коллагеназы и инкубируйте. Коллагеназа разрушает внеклеточный матрикс.
Постирайте с буфером. Добавьте трипсин-ЭДТА и инкубируйте, чтобы нарушить межклеточные соединения, разрыхляя клетки.
Переложите ДРГ в пробирку, центрифугу и выбросьте надосадочную жидкость.
Повторно суспендируйте ткань в питательных средах и пипетке для высвобождения клеток.
Перенесите клетки на культуральную пластину с полимерным покрытием для облегчения прикрепления.
Удалите среду и добавьте свежую среду, содержащую ингибиторы и факторы роста.
Ингибиторы ограничивают пролиферацию глиальных клеток, в то время как факторы роста способствуют росту нейронов.
Соберите ганглии спинного корешка поясничного отдела из туловища двух-трехнедельной
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео