Вскрытие и монтаж эксплантов мозга личинок плодовой мухи

Начните с личинок дрозофилы, плодовой мухи, в физиологическом растворе внутри посуды. Раствор предотвращает обезвоживание личинок.

Под микроскопом вскрытия определите местоположение переднего конца личинок с помощью ротовых крючков.

Передний конец содержит глазные диски и центральную нервную систему, или ЦНС, которая состоит из долей мозга и вентрального нервного канатика.

Придерживайте задний конец личинки с помощью щипцов. С помощью другой пары щипцов потяните за передний конец, чтобы извлечь внутренние органы.

Удалите кишечник и прилегающие мышцы, чтобы изолировать ЦНС, прикрепленную к глазным дискам.

Чтобы установить мозговой эксплант, перенесите извлеченную ткань на физиологический раствор, заключенный в жирный барьер на предметном стекле

Убедитесь, что спинная сторона экспланта обращена вверх, и запечатайте ткань покровным стеклом. Мозговой эксплант готов к анализу.

Чтобы собрать мозг личинки дрозофилы под микроскопом, используйте одну пару щипцов для рассечения со стандартным наконечником No 5, чтобы удерживать образец личинки на месте, в то время как другой используйте для тщательного препарирования мозга, сохраняя глазные диски, доли мозга и вентральный нервный канатик. Затем удалите прикрепленные мышцы, чтобы свести к минимуму любое движение образца во время визуализации. Когда все мозги будут собраны, используйте вакуумную смазку, чтобы нарисовать квадратную камеру на предметном стекле, и добавьте в камеру 20 микролитров наружного солевого раствора.

С помощью щипцов перенесите мозги в камеру и отрегулируйте положение мозгов под микроскопом тыльной стороной вверх. Накройте камеру стеклянной защитной крышкой и осторожно нажмите на защитную крышку, чтобы уменьшить смещение образца во время процедуры визуализации.