Дифференцировка индуцированных плюрипотентных стволовых клеток в нейральные клетки-предшественники

Возьмите микропланшет, содержащий адгезивную культуру эмбриональных фибробластов мыши, или МЭФ, в среде.

Адгезивные MEF функционируют как питательный слой, обеспечивая поддерживающее микроокружение клеточной культуры.

Удалите среду и введите индуцированные плюрипотентные стволовые клетки человека, или ИПСК, в среду ИПСК с добавлением небольших молекул, повышающих выживаемость клеток.

Инкубируйте, чтобы позволить ИПСК прилипнуть к питательному слою, который выделяет факторы роста, способствующие пролиферации ИПСК

Удалите среду и добавьте раствор фермента, чтобы отделить клетки. Пересадите клетки и центрифугируйте их, затем удалите надосадочную жидкость и снова суспендируйте их в среде hiPSC.

Перенесите клетки на пластину с биополимерным покрытием. Инкубируйте, чтобы МЭФ прилипли.

Перенесите взвешенные ИПСК на микропланшет с V-образным дном. Центрифугируйте клетки и инкубируйте их, вызывая образование клеточных агрегатов.

Пополняют с помощью дифференцировочной среды. Питательные вещества среды и межклеточные взаимодействия в агрегате способствуют дифференцировке ИПСК в нейральные клетки-предшественники.

Для этого протокола начните с создания питающих клеток. Чтобы создать эту культур